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嘿!PTM ! 我抓住你啦!

作者:admin信息來源:達科為日期:2019年05月22日打印字體:  
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*偷偷告訴你:文末有驚喜!!!

PTM全稱Post-translationalmodification,即翻譯后修飾,是蛋白質生物合成過程的較后步驟。PTM之于蛋白質,有點像PS之于照片,經過PTM的蛋白質會有不同的樣子和功能。

今天給大家介紹一款很厲害的試劑盒,能夠準確高效的提取并富集不同的PTM,方便您的后續研究~

蛋白質是生命活動的主要承擔者,蛋白質層面的研究,最常被關注的就是蛋白表達量的改變。然而,蛋白表達量高低的調控形式過于單一,難以滿足生物體如此復雜的運行要求。

那么如何解決這個問題呢?別急,大自然早就為蛋白質加好了buff~ 這個buff就是PTM, 蛋白質的翻譯后修飾。

蛋白質的翻譯后修飾(Proteinpost-translational modification, PTM)是一項重要的技能,是指在蛋白質的氨基酸側鏈上共價結合化學小分子基團例如我們最了解的磷酸化修飾:

據估計,哺乳動物含有數百萬種獨特的蛋白質組但其卻源于一個相對簡單的基因組(約25000個基因),蛋白質組的復雜程度和蛋白質功能的多樣性都要歸功于PTM

目前已知的PTM的種類超過400種,幾乎所有的蛋白質均可發生PTM。并且,同一個蛋白質還可同時具有多種PTM蛋白發生PTM后,會顯著改變其理化性質和構象,從而直接改變蛋白的結合能力與功能。因此,即使蛋白本身的表達水平沒有改變,但如果翻譯后修飾的狀態發生改變,蛋白的功能也會顯著變化。

PTM這個超級buff的加持下,蛋白質的種類和功能都得到了指數級擴增。

下圖以中間絲蛋白(IF)為例,描述了針對于IF的各種不同PTM對于其蛋白功能的影響:

盡管目前已知的PTM的種類超過400但只有少數幾個被詳細研究過,主要包括甲基化、磷酸化、乙酰化、泛素化和SUMO化,它們被證明是幾乎所有細胞的關鍵調節因素,包括信號轉導、表觀遺傳學、基因和蛋白質表達、蛋白質穩定性和定位以及細胞免疫。

目前主要研究的PTM及其作用和特點

PTM類別

已發表作用

新發現作用

目標氨基酸

修飾物

甲基化

表觀調節

蛋白質互作,信號轉導

R, K

甲基轉移酶,

去甲基化酶

磷酸化

信號轉導

蛋白質互作,表觀調節

Y,  S, T

激酶,磷酸酶

乙酰化

表觀和代謝調節

蛋白質穩定性、定位、合成

K

乙酰化酶,

去乙酰化酶

泛素化

蛋白酶體靶向-降解

蛋白質定位,蛋白質互作

K

泛素連接酶,    

去泛素化酶

SUMO

核蛋白定位,轉錄活性

蛋白質穩定性、應激反應、細胞周期

K

SAE,  ubc9, SENP

蛋白修飾及功能的多樣性是維持機體復雜精準調控的基礎,但同時也給研究PTM的科研人員的研究造成了很多的困擾。

為什么蛋白質翻譯后修飾的鑒定難度要遠遠高于未發生修飾的蛋白質的鑒定,主要有以下幾點原因:

  • 發生翻譯后修飾的蛋白質樣本量相對較少

  • 發生修飾時形成的共價鍵非常不穩定,且處于動態變化中 

  • 修飾與未修飾的蛋白及多種修飾形式的蛋白常混合存在 

針對這些困擾,Cytoskeleton公司開發了一系列名為 Signal-Seeker? 的試劑盒,用于研究各種蛋白翻譯后修飾。

Signal-Seeker? 試劑盒使用親和磁珠從任何給定的細胞或組織裂解液中提取并富集修飾蛋白,然后通過標準的Western blot程序分析濃縮蛋白群,最終用戶使用自身的抗體檢測所需的修飾蛋白。

Signal-Seeker?試劑盒檢測流程如下圖

Signal-Seeker?試劑盒的特點和優勢

  • Signal-Seeker?試劑盒配套相應的抗體,能對任意蛋白的轉錄后修飾進行研究;

  • Signal-Seeker?試劑盒提供通用的裂解過濾系統及定量工具,能輕松從給定的細胞或組織裂解液中提取蛋白并進行總蛋白的定量; 

  • Signal-Seeker?親和磁珠,富集效果無與倫比,配合對照磁珠,提供PTM蛋白精準定量;

  • Signal-Seeker?親和磁珠可用于捕獲PTM修飾的蛋白,然后用于進行進一步的分析(如Westernblot和質譜檢測); 

  • 關鍵的去修飾化抑制劑,防止檢測過程中的去修飾;

  • Signal-Seeker?kit可以用于研究多重PTM的串擾(例如目標蛋白的泛素化和乙酰化);

  • 市面上最全面的PTM試劑盒:包括通用裂解過濾系統、蛋白質定量工具、IP濃縮試劑、洗滌試劑、洗脫試劑、化學發光試劑。 

Signal-Seeker?試劑盒應用實例

Signal-Seeker?試劑盒研究Rac1蛋白的單泛素化多元泛素化

用MG-132預處理Swiss 3T3 細胞,然后添加/不添加CNF1 (cat# CN04)處理3h,用BK161 kit來進行 IP,裂解液上樣量300 μg /次。

Lane 1: 3 μg 未處理的裂解液;

Lane 2: Ubiquitin親和磁珠(cat# UBA01) +未處理的裂解液;

Lane 3: UBA01 + CN04處理的裂解液;

Lane 4: Ubiquitin 對照磁珠(cat# CUB02) +未處理的裂解液;

Lane 5: CUB02 + CN04處理的裂解液.

*注:用細菌毒素CNF1(cat#CN04)處理細胞會導致Rac1的組成性激活,并隨后導致單泛素化和多泛素化。

可以看到,未經修飾的Rac1與泛素親和珠和泛素對照珠(lane 2-5)發生非特異性相互作用;然而,單泛素化和多泛素化Rac1僅與泛素親和珠(lane 3)結合,而與泛素對照珠(lane 5)不結合。所以建議用戶在實驗時使用適當的對照珠來幫助區分未修飾的目標蛋白帶。


為了幫助大家更好的抓住PTM并且研究它們,現在Cytoskeleton公司對以下PTM研究相關產品進行促銷:

即日起至2019.6.30

購買以下任意產品均可享受7折優惠

不要錯過哦~

此次促銷產品清單如下

Signal-Seeker?試劑盒

BK160

Signal-Seeker? Phosphotyrosine  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK160-S

Signal-Seeker?  Phosphotyrosine Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK161

Signal-Seeker? Ubiquitin  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK161-S

Signal-Seeker? Ubiquitin  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK162

Signal-Seeker? SUMOylation  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK162-S

Signal-Seeker? SUMOylation  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK163

Signal-Seeker?  Acetyl-Lysine Enrichment Kit

KIT 30  assays

BK163-S

Signal-Seeker? Acetyl-Lysine  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK165

Signal-Seeker?  SUMOylation-1 Enrichment Kit

KIT 30  assays

BK165-S

Signal-Seeker? SUMOylation-1  Enrichment Kit

KIT 10 assays

乙酰化抗體

AAC01

Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal  Antibody (3C6.08.20)

2 x 100 μl

AAC01-S

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody (3C6.08.20)

1 x 25 μl

AAC02

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody  (7B5A1)   

2 x 100 μl

AAC02-S

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody  (7B5A1)   

1 x 25 ul

AAC03

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody (19C4B2.1)

2 x 100 μl

AAC03-S

Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody  (19C4B2.1)

1 x 25 ul

AAC03-HRP

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody HRP Conjugates

1 x 100 μl

AAC03-HRP-S

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody HRP Conjugates

1 x 25 ul

AAC04-beads

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody Agarose Conjugates

4 x 500 μl

AACX1

Chemically  Acetylated Bovine Serum Albumin (BSA)

1 x 500 μg

磷酸化抗體

APY03

Anti-Phosphotyrosine Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 μl

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine  Affinity Beads

4 x 300 μl

APY03-HRP

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody

1 x 100 μl

APY03-HRP-S

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 μl

APY03-HRP-XL

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody

Large Quantities

APY03-S

Anti-Phosphotyrosine Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 μl

SUMO化抗體

ASM01

Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal  Antibody

1 x 100 μl

ASM01-S

Anti-SUMO-1  Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 μl

ASM11-Beads

SUMOylation-1 Affinity Beads

3 x 400 μl

ASM23

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 μl

ASM23-HRP-S

Anti-SUMO-2/3-HRP labeled  Mouse Monoclonal Antibody (Clone 12F3)

1 x 25 μl

ASM23-HRP

Anti-SUMO-2/3-HRP labeled  Mouse Monoclonal Antibody (Clone 12F3)

1 x 100 μl

ASM23-S

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 μl

ASM24

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 200 μl

ASM24-Beads

SUMO-2/3 Affinity Beads

2 x 400 μl

ASM24-S

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 150 μl

泛素化抗體

AUB01

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 μl

AUB01-HRP

Anti-Ubiquitin-HRP  Antibody

1 x 100 μl

AUB01-HRP-S

Anti-Ubiquitin-HRP Antibody

1 x 25 μl

AUB01-S

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody (Trial size)

1 x 25 μl

AUB01-XL

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody

4 x 500 μl

其他相關試劑

BLR01

BlastR  Rapid Lysate Prep Kit

50  purifications

BLR02

BlastR Rapid Filtration Kit

50 purifications

CIG01-beads

Control for  Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CIG02-beads

Control for Acetylation  Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CIG03-beads

Control for  SUM01 Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CUB02-beads

Control for Ubiquitin  Affinity Beads

10 assays

UBA01-beads

Ubiquitin  Affinity Beads

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